Активність матриксної металопротеїнази-2 в сироватці крові хворих на гемобластози
30

Реактиви:

1. 0,04 % розчин желатину на фосфатному буфері, рН 7,4;

2. Етиловий спирт 50,0 %;

3. Нінгидрин 3,0 % на метилцелозольві;

4. Реактив С (рівні об'єми 3,0 % розчину нінгідрину та 4,0 мМ ацетатного буфера, рН 5,4).

Хід визначення: до 0,4 мл субстрату додавали 0,1 мл надосадової рідини і предінкубували протягом 30 хвилин при 37ºС. Потім додавали 0,5 мл реактиву С С і кип'ятили  15 хвилин. Після охолоджування в дослідні пробірки додавали 2,0 мл 50 % етилового спирту.

Для кожної дослідної проби ставили контроль: до 0,1 мл надосадової рідини додавал|и 0,5 мл реактиву С, потім 0,4 мл субстрату, кип'ятили 15 хвилин. Проби охолоджували і приливали 2,0 мл 50 % етилового спирту.

Вимірювали екстинкцію розчину при 570 нм, прот|и контролю на реактив, в якому замість 0,1 мл супернатанту вносили 0,1 мл 0,9 % NaCl|.

Активність ММП-2 визначали за  формулою:

А = (К/ k ×Т) × n,

де

А – активність ферменту в мілімолях гліцину/мг тканини;

К – коефіцієнт перерахунку величини екстинкції в мілімолі гліцину, який визначали по калібрувальному графіку;

k – коефіцієнт перерахунку на мг тканини в пробі;

Т – час інкубації в хвилинах;

n – розведення ферментного розчину.

2.2.3.  Статистична обробка результатів дослідження