1.1 Суть метода аффинной хроматографии

Аффинная хроматография (от лат. affinis - родственный) (биоспецифич. хроматография, хроматография по сродству), метод очистки и разделения биополимеров, основанный на исключительной способности биологически активных веществ связывать специфически и обратимо другие вещества, называемые в общем случае лигандами или аффинными лигандами, или упрощенно аффинантами.

В аффинной хроматографии выделяют две фазы: подвижной фазой (элюентом) служит жидкость, неподвижной фазой может быть твердый сорбент. Главная особенность, которая обусловливает высокую эффективность этого метода, состоит в том, что разделение основано на различии не физико-химических признаков молекулы (заряда, формы и размера), а специфичности функциональных свойств, отличающих данный фермент от множества других биополимеров. Разделение в аффинной хроматографии обычно проводят на хроматографических колонках в две фазы (адсорбция и десорбция); иногда разделяемую смесь помещают в сосуд с сорбентом и выдерживают до полного связывания исследуемого компонента. Затем сорбент (в колонке или сосуде) промывают буферным раствором для удаления не связавшихся веществ, после чего десорбируют исследуемый компонент. Десорбция (элюция) последнего обычно достигается повышением ионной силы, изменением рН буферного р-ра или добавлением в него органического растворителя, что ослабляет взаимодействие лиганд-фермент. Более избирательна десорбция раствором лиганда.

Различают колоночную жидкостную хроматографию, в которой через колонку, заполненную неподвижной фазой, пропускают порцию разделяемой смеси веществ в потоке элюента (под давлением или под действием силы тяжести), и тонкослойную жидкостную хроматографию, в которой элюент перемещается под действием капиллярных сил по плоскому слою сорбента, нанесенного на стеклянную пластинку или металлическую фольгу, вдоль пористой полимерной пленки, по поверхности цилиндрической кварцевой или керамической палочки, по полоске хроматографической бумаги. [1]