Афинная хроматография
11

Рис. 3. Биоспецифической адсорбции (А), элюирования «деформирующим» буферным раствором (Б) и биоэлгоирования растворимым конкурент­ным лигандом (В). Инг — иммобилизованный ингибитор; L — конкурентный лиганд.

Метод аффинной хроматографии применен для исследования механизмов ферментативных процессов и выяснения структур молекул. Аканума и сотр. применили его для изучения связывающего участка бычьей карбоксипептидазы В, исследуя комплексообразовапие с иммобилизованными субстратными аналогами основных и ароматических аминокислот. Используя аффинную хроматографию, Дилени и О'Карра показали, что оксалоацетат ингибнрует лактатдегидрогеназу путем образования тройного непродуктивного комплекса с комплексом фермент – NAD+, а не с комплексом фермент - NАDН, как предполагалось первоначально.

Использование аффинной хроматографии для определения, например, констант ингибирования ферментов, по-видимому, весьма перспективно. Данные об объемах элюатов, содержащих фермент, на колонке с иммобилизованным ингибитором, полученные при использовании различных концентраций ингибитора в растворе, позволяют определить константы ингибирования как для связанного ингибитора, так и для ингибитора в растворе. Большое преимущество этого метода состоит в том, что при использовании одного и того же ингибитора как для иммобилизации, так и для элюирования можно непосредственно сделать выводы о влиянии связей с носителем и природы носителя на изучаемое взаимодействие на основании совпадения или различий в определяемых величинах констант диссоциации. Следовательно, метод аффинной хроматографии открывает новые возможности не только для изучения взаимодействия биологически